文献类型：期刊文章

作　　者：贺英[1] 史秋梅[1] 潘素敏[1] 张艳英[1] 邵欣华[2]

机构地区：[1]河北科技师范学院动物科技学院河北省预防兽医重点实验室,河北昌黎066600 [2]河北新华科极兽药有限公司,河北石家庄051430

出　　处：《中国兽医学报》

基　　金：石家庄市科技支撑计划项目(09150293A);河北科技师范学院科研创新团队项目(CXTD2012-01);河北省自然科学基金资助项目(C2013407106)

年　　份：2013

卷　　号：33

期　　号：11

起止页码：1642-1646

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAB、CAS、CSCD、CSCD2013_2014、JST、RCCSE、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：表达犬细小病毒VP2蛋白(CPV-VP2),用于重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,并为犬细小病毒病的诊断奠定基础。采用PCR方法对CPV-VP2基因进行扩增,将CPV-VP2基因克隆到毕赤酵母分泌表达载体pPICZAA中,构建真核重组表达载体pPICZAA-VP2,将该重组质粒线性化后,转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)X-33中,甲醇诱导表达CPV-VP2,SDS-PAGE和Western-blotting鉴定表达蛋白。结果,成功扩增了CPV-VP2基因,构建了真核重组表达载体pPICZAA-VP2,在毕赤酵母菌中表达出约68 000蛋白。Western-blotting鉴定表明,表达蛋白为目的蛋白VP2。表达菌株扩大表达体系于培养基中培养,上清液用70%过硫酸铵4℃沉淀浓缩,采用His选择镍-亲和层析柱分离纯化获得重组的酵母表达的带组氨酸标签的VP2蛋白,表达量约3mg/L。结果表明,在毕赤酵母中成功地表达了CPV-VP2蛋白,且能被犬细小病毒VP2单克隆抗体特异识别。

关 键 词：犬细小病毒VP2基因  毕赤酵母 真核表达

分 类 号：S852.65]