文献类型：期刊文章

作　　者：潘兴[1,2] 肖继红[3] 杨靖[1,4] 王保宁[1,2] 李健春[2] 周法庭[1,2] 祝捷[2] 周永君[2] 李婉宜[1] 李明远[1]

机构地区：[1]四川大学华西基础医学与法医学院,四川成都610041 [2]四川万可泰生物技术有限责任公司,四川成都610000 [3]兰州大学第二医院体检中心,甘肃兰州730030 [4]湖北医药学院微生物学教研室,湖北十堰442000

出　　处：《西部医学》

基　　金：四川省科技厅科技支撑项目(2008SZ0025);湖北省教育厅科学技术研究项目(B2013115)

年　　份：2013

卷　　号：25

期　　号：10

起止页码：1451-1454

语　　种：中文

收录情况：JST、RCCSE、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的构建融合了幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(Ure I)、尿素酶B亚单位(Ure B)的表位基因及霍乱毒素B亚单位(CTB)的原核表达质粒pET28a(+)/ct B/ure I-B(简称BIB)及其原核表达工程菌,并研究其生物学特性。方法参考基因库中ure I、ure B、ct B的基因序列,合成不含信号肽的ct B基因及ure I、ure B优势表位基因,串联融合,形成多靶点重组ct B/ure I-B基因(简称BIB基因),并构建pET28a(+)/BIB原核表达质粒,经限制性内切酶Nco I、Xho I酶切以及DNA测序鉴定正确后,将重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)中,构建含BIB基因的原核表达工程菌。经乳糖诱导后,SDS-PAGE电泳检测重组蛋白(rBIB),Western blot及肌注BALB/c小鼠实验检测rBIB的免疫反应性和免疫原型。结果构建的原核表达质粒pET28a(+)/BIB,经双酶切和测序分析显示,构建的BIB基因与设计序列100%一致。乳糖诱导后,SDS-PAGE电泳显示在33kD左右出现一条明显蛋白条带,Western blot检测在33kD左右出现特异反应条带,肌注免疫BALB/c小鼠产生了较高的抗体水平。结论成功构建了pET28a(+)/BIB原核表达质粒及BIB原核表达工程菌,该工程菌可表达重组蛋白rBIB,且该重组蛋白具有良好的免疫反应性及免疫原性。

关 键 词：幽门螺杆菌 原核表达工程菌  URE CTB 重组多表位  

分 类 号：R378.2]