文献类型：期刊文章

作　　者：孙晓林[1] 李梅[1] 唐佳昕[2] 李淑珍[1] 唐晓波[1]

机构地区：[1]哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室,150081 [2]上海交通大学医学院

出　　处：《国际免疫学杂志》

基　　金：哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目（2008RFXXS018）

年　　份：2013

卷　　号：36

期　　号：4

起止页码：325-328

语　　种：中文

收录情况：CAS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的克隆人角蛋白19（CK19）基因，原核表达重组蛋白并纯化，为建立一种新的非小细胞肺癌诊断方法奠定基础。方法从宫颈癌HeLa细胞株中提取总RNA，经RT—PCR合成eDNA，设计特异性的引物，用PCR的方法扩增目的片段，构建pET．32a—CK19和pGEX-4T1-CK19表达载体，在BL21大肠杆菌中表达CK19重组蛋白纯化，并进行SDS—PAGE及Westernblot鉴定。结果经PCR扩增后得到一条420bp的DNA片段，构建载体后DNA测序，结果与预期序列一致。初步结果鉴定表明，表达和纯化的融合蛋白，与预期结果一致。结论成功克隆CK19基因，并获得高纯度的CK19融合蛋白，为进一步制备体外诊断试剂打下基础。

关 键 词：非小细胞肺癌 人角蛋白19  克隆 表达  纯化

分 类 号：R734.2]