文献类型：期刊文章

作　　者：吕芬[1] 刘忠[1] 银兴峰[2] 赵振岭[1] 陈妙娟[2] 张嘉萱[1] 陈伟[1] 钱垂文[1] 熊盛[1]

机构地区：[1]暨南大学生命科学技术学院生物医药研究开发基地,广州510632 [2]暨南大学生命科学技术学院生命与健康工程研究院,广州510632

出　　处：《生物技术通报》

基　　金："重大新药创制"科技重大专项(2012ZX09103301-033);暨南大学科研培育与创新基金杰出人才培育项目(11611206)

年　　份：2013

卷　　号：29

期　　号：5

起止页码：137-143

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAS、CSCD、CSCD_E2013_2014、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：旨在了解核苷二磷酸激酶A(NDPK-A)的功能,通过GST-Pull down技术寻找与其存在体外相互作用的蛋白。以含有目的片段的质粒pBV-NDPK-A为模板,扩增出相应的目的基因片段,将其插入带有GST标签的原核表达载体pGEX-4T-2,构建重组表达质粒。双酶切及测序鉴定正确后,转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,Glutathione Sepharose 4B亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳及Western blot确定融合蛋白的表达,并与高表达细胞系A549孵育,进行GST-Pull down试验,并通过LC-MS/MS质谱鉴定体外与NDPK-A相互作用的蛋白。结果显示,成功构建GST-NDPK-A的原核表达载体;在大肠杆菌BL21中诱导表达出可溶性融合蛋白;经Glutathione Sepharose 4B纯化后,获得了有生物活性的GST-NDPK-A融合蛋白,GST-Pull down试验和质谱鉴定结果发现NDPK-A与Fussel-18、Rrp12体外存在相互作用。

关 键 词：NDPK-A  Fussel-18  Rrp12  表达纯化 相互作用

分 类 号：Q51]