文献类型：期刊文章

作　　者：张蕾[1,2] 张西萌[1] 张海予[2] 魏海燕[1] 马丹[1] 刘雪松[3] 曹栋[3] 曾静[1]

机构地区：[1]北京出入境检验检疫局,北京100026 [2]北京农学院,北京102206 [3]北京大学实验动物中心,北京100871

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》

基　　金：质检总局公益项目(201110034);国家质检总局科技计划项目(2009IK184)

年　　份：2013

卷　　号：29

期　　号：7

起止页码：734-738

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAS、CSCD、CSCD2013_2014、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的制备副溶血性弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体(mAb)并建立双抗夹心ELISA。方法采用差速离心法提取副溶血性弧菌ATCC 17802菌株的鞭毛蛋白,并以此为抗原免疫BALB/c小鼠,抗血清效价达到1∶32 000时,取脾细胞与生长良好的对数期Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合。多次克隆化培养后获得杂交瘤细胞株并制备腹水,纯化后得到抗体。结果获得6株持续、稳定分泌抗副溶血性弧菌鞭毛蛋白mAb的杂交瘤细胞株,命名为VpNo.1～VpNo.6,抗体效价高达1∶2×106。对抗体进行了Ig类和亚类检测以及Western blot法鉴定,其Ig亚类依次为IgG1、IgG1、IgM、IgG1、IgG2a和IgM。SDS-PAGE结果显示,提取出的鞭毛蛋白相对分子质量(Mr)为42 000并且纯度较高。采用VpNo.6抗体建立了副溶血性弧菌双抗夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到103CFU/mL菌液,通过采用134株副溶血性弧菌和74株非副溶血性弧菌进行特异性实验,结果表明134株副溶血性弧菌呈阳性反应,74株非副溶血性弧菌呈阴性反应,VpNo.6抗体具有非常好的特异性。在基质添加试验中,最低检出限为21 CFU/g样品。结论成功制备了副溶血性弧菌鞭毛蛋白mAb,并将其应用于双抗夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到1×103CFU/mL菌液,与所测试的非副溶血性弧菌没有交叉反应。

关 键 词：副溶血性弧菌 鞭毛蛋白 单克隆抗体 双抗夹心ELISA  

分 类 号：R392.11] R378.3[基础医学类]