期刊文章详细信息
GM-SCF与LMP2A融合基因GC2A重组腺病毒载体的构建与鉴定
Construction and identification of recombinant adenovirus vector with the fusion gene GC2A:GM-SCF and LMP2A
文献类型:期刊文章
机构地区:[1]济宁医学院病原生物学教研室.医学免疫学省级重点学科,山东济宁272013 [2]济宁市肿瘤医院检验科,山东济宁272013
基 金:山东省卫生厅支持项目(2007HW035);济宁市医药卫生科技资助项目(JN201208)
年 份:2013
卷 号:20
期 号:11
起止页码:830-834
语 种:中文
收录情况:AJ、BDHX、BDHX2011、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、EMBASE、IC、RCCSE、SCOPUS、UPD、ZGKJHX、核心刊
摘 要:目的:构建人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因与EB病毒基因LMP2A融合基因GC2A的重组腺病毒表达载体。方法:将构建的融合基因GC2A定向亚克隆至质粒pAdTrack-CMV上,经酶切及电泳检测后,PmeL酶切pAdTrack-CMV-GC2A,与质粒pAdEasy-1一起电转化E.coli.BJ5183,筛选重组菌,经PacⅠ酶切鉴定后用磷酸钙法转染QBI-293A细胞,包装成重组腺病毒vAd-GC2A,采用pAdTrack-CMV-GC2A中报告基因GFP的表达,观测其表达情况。结果:采用内切酶Bg1Ⅱ和EcoRⅤ对质粒pAdTrack-CMV-GC2A进行双酶切分析,电泳后可观察到约1 961和9 200bp的片段。重组腺病毒载体经PacⅠ酶切后观察到约33kb的DNA片段和4.5kb的DNA片段,说明pAdTrack-CMV-GC2A和pAdEasy-1的重组发生在ori和右臂区,pAd-GC2A经PacⅠ酶切线性化后,磷酸钙法转染293细胞,56h后在荧光倒置显微镜下可看到有绿色荧光出现,说明已转染成功,并能在293细胞中表达。结论:融合基因GC2A正确插入,真核表达载体vAd-GC2A成功构建,在293细胞中包装获得重组腺病毒。
关 键 词:人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子 融合基因GC2A 基因重组 腺病毒载体
分 类 号:R73-3]
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引证文献:
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