文献类型：期刊文章

作　　者：李金海[1,2] 李兴玉[3] 曹三杰[1] 文心田[1] 陈斌[2] 张毅[2] 周哲学[2]

机构地区：[1]四川农业大学动物医学院猪病研究中心,雅安625014 [2]四川省动物疫病预防控制中心,成都610041 [3]四川省畜牧科学研究院,成都610066

出　　处：《中国人兽共患病学报》

基　　金：公益性行业(农业)科研专项(No.201203056)~~

年　　份：2013

卷　　号：29

期　　号：4

起止页码：380-384

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2011、CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2013_2014、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：目的建立一种能快速、高效、敏感、特异地检测口蹄疫病毒(FMDV)的一步法荧光定量RT-PCR检测方法。方法根据FMDV聚合酶3D基因序列比对结果,设计特异性引物和MGB探针;通过优化,得到最佳反应体系和反应条件;分别以质粒和病毒RNA为模板,构建标准曲线;并进行特异性、敏感性、重复性试验。结果该方法能特异性检测A型、O型、Asia 1型FMDV,而对猪瘟、猪蓝耳病、猪圆环病毒、猪细小病毒、猪狂犬病毒、猪乙型脑炎等病原检测结果均为阴性;构建的荧光定量标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系,检测质粒的敏感性可达83.4copies/μL,检测病毒RNA的敏感性可达7.1fg/μL,比多重RT-PCR敏感性高10倍;对4份样品进行5次批内和批间重复检测,检测结果变异系数均小于2%。结论建立的口蹄疫病毒一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于口蹄疫临床样品诊断、流行病学调查和畜产品安全监测。

关 键 词：口蹄疫病毒 TaqMan-MGB  荧光定量RT—PCR  

分 类 号：R373]