文献类型：期刊文章

作　　者：常慧[1,2] 伊瑶[2] 赵敏[2,3] 周为民[2] 赵国霞[2,3] 王慧娟[2] 毕胜利[2] 高基民[3] 刘冰[1] 谭文杰[2,3]

机构地区：[1]吉林大学白求恩医学院遗传学系,长春130021 [2]中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,北京102206 [3]温州医学院医学病毒学研究所,温州325000

出　　处：《病毒学报》

基　　金：国家863课题(2007AA02Z464);传染病重大专项(2008ZX10004-014)

年　　份：2013

卷　　号：29

期　　号：2

起止页码：106-111

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、BIOSISPREVIEWS、CAB、CAS、CSCD、CSCD2013_2014、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：人冠状病毒NL63受体结合区蛋白是其免疫学诊断和疫苗研究的主要靶点,在受体吸附、病毒进入细胞及膜融合中起关键作用。本研究在E.coli系统中进行人冠状病毒NL63受体结合区(RBD)大、小蛋白的表达纯化,并对其进行免疫学鉴定。首先密码子优化设计合成了HCoV-NL63的RBD大片段(RL:232-684aa)与小片段(RS:476-616aa)的编码基因,并将其克隆进硫氧还蛋白表达载体pM48,构建了人冠状病毒NL63的受体结合区蛋白(RBD)大(RL)、小(RS)片段与硫氧还蛋白的融合表达质粒;转化E.coli BL21pLys S,利用IPTG进行诱导表达,用镍亲和层析对蛋白进行纯化,并以表达HCoV-NL63RL与RS蛋白的重组痘苗病毒免疫小鼠血清对重组蛋白进行免疫印迹鉴定。结果表明在37℃,0.8mM IPTG诱导4h时,蛋白表达量达到最高,融合蛋白主要以包涵体形式表达,纯化后纯度可达95%以上。Western blot显示,两个融合蛋白均与痘苗病毒(天坛株)表达的HCoV-NL63RL与RS蛋白免疫的小鼠血清发生特异性反应。本研究首次在国内用原核系统表达纯化并鉴定了人冠状病毒NL63受体结合区大小蛋白(RL和RS),为人冠状病毒NL63感染的免疫学检测与疫苗研究提供了基础。

关 键 词：HCoV  NL63  受体结合区蛋白  重组蛋白 表达  大肠杆菌

分 类 号：R373.1]