文献类型：期刊文章

作　　者：陈锴[1] 姚华伟[2] 王长江[3] 徐璐[2] 范学政[2] 赵启祖[2] 邹兴启[2] 朱元源[2] 赵燕[2] 杨光友[1] 王琴[2]

机构地区：[1]四川农业大学动物医学院,四川雅安625014 [2]中国兽医药品监察所,北京100081 [3]新疆维吾尔自治区畜牧科学院,乌鲁木齐830000

出　　处：《中国农业科学》

基　　金："十一五"国家支撑计划课题(2006BAD06A18;2006BAD06A12);新疆维吾尔自治区2012科技援疆项目(201291150)

年　　份：2013

卷　　号：46

期　　号：1

起止页码：162-169

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAB、CAS、CSCD、CSCD2013_2014、FSTA、GEOBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：【目的】建立一种快速、敏感、特异的检测猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)的荧光定量PCR方法(FQ-PCR),为猪瘟兔化弱毒疫苗的效力检验提供一替代方法。【方法】在猪瘟兔化弱毒疫苗基因组3′非编码区设计一对针对猪瘟兔化弱毒株的特异性引物和一条MGB探针,并进行反应体系及反应条件优化,以及特异性、灵敏度、稳定性及符合性试验。将此方法用于部分批次疫苗厂疫苗半成品的定量检验,与兔热反应进行比较,寻求两方法的相关性。【结果】试验结果证实,CT值与模板之间呈现良好的相关性,相关系数为0.9998,扩增效率为101.14%;该方法仅扩增HCLV,不扩增HCLV以外的其它病原,显示良好的特异性;具有较高的灵敏度,能检测模板中4.35个cDNA拷贝量,比CSFV-RT-nPCR高1个数量级。将此方法应用于4个厂家17个批次的34份猪瘟兔化弱毒疫苗效力检验,两只兔子均无热反应(不合格)样品共11份,FQ-PCR CT值为21.15—27.30;两只兔子一只呈现定型热,一只无热反应的样品12份,CT值为17.47—23.70;两只兔子都呈现定型热或者一只呈现定型热一只呈现轻热反应(合格品)样品共11份,CT值为17.10—20.8。【结论】建立的HCLV-FQ-PCR方法能特异性的检测疫苗核酸含量,与家兔热反应测定结果存在良好的相关性,可以用于猪瘟疫苗半成品中HCLV定量检测。

关 键 词：猪瘟兔化弱毒疫苗 效价检验  荧光定量PCR TaqMan-MGB  

分 类 号：S858.28]