文献类型：期刊文章

作　　者：吴凯朝[1,2,3] 黄诚梅[3] 李杨瑞[1,2,3] 杨丽涛[1,2] 吴建明[2]

机构地区：[1]广西大学/广西亚热带生物资源保护和利用重点实验室,南宁530005 [2]中国农业科学院甘蔗研究中心/广西农业科学院甘蔗研究所/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室/广西甘蔗遗传改良重点实验室,南宁530007 [3]广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室,南宁530007

出　　处：《南方农业学报》

基　　金：国家科技支撑计划项目子项目(2012BAD40B04);广西自然科学基金创新团队项目(2011GXNSFF018002);广西自然科学基金项目(2010GXNSFD013034);广西农业科学院创新团队项目(桂农科2011YT01)

年　　份：2012

卷　　号：43

期　　号：12

起止页码：1934-1939

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAB、CAS、CSCD、CSCD_E2011_2012、FSTA、IC、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：【目的】建立适用于禾本科作物不同组织总RNA的快速、高效提取方法,为进行后续的分子生物学研究奠定基础。【方法】采用Trizol试剂法,通过改变抽提上清液吸取量、沉淀方法及沉淀漂洗次数,对甘蔗、玉米和水稻的叶片、茎尖和根尖的总RNA提取方法进行优化。【结果】与吸取0.4mL上清液相比,吸取0.2mL上清液的总RNA OD260/OD280、OD260/OD230值分别在1.95～2.00和2.11～2.44,所获得的总RNA纯度较高。沉淀漂洗两次的OD260/OD230值(2.11～2.47)明显高于沉淀漂洗1次的总RNA OD260/OD230值(1.01～1.61),总RNA纯度较高。经异丙醇沉淀所得的各材料的总RNA28S、18S和5S谱带清晰,无拖尾现象,总RNA完整性较好;LiCl沉淀法的RNA条带较模糊粘连,5S条带明显弥散,总RNA产率相对较低。以Trizol-异丙醇法提取的甘蔗总RNA为模板进行GAPDH基因片段扩增,所获甘蔗的叶片、茎尖和根尖的GAPDH基因表达丰度很强,无特异扩增,目的片段长度为153bp。【结论】改良Trizol-异丙醇法提取甘蔗、玉米和水稻不同组织的总RNA带型清晰、完整性好、纯度和产率高,适用于快速、高效提取禾本科植物不同组织总RNA。

关 键 词：RNA Trizol试剂法  改良Trizol-异丙醇法  甘蔗 水稻 玉米  

分 类 号：Q781]