文献类型：期刊文章

作　　者：姜怡邓[1] 孙炜炜[1] 马胜超[1] 王菊[1] 巩慧慧[1] 马长剑[1]

机构地区：[1]宁夏医科大学检验学院,宁夏银川市750004

出　　处：《中国动脉硬化杂志》

基　　金：国家自然科学基金项目(30960124和81160044);教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-10-0916)

年　　份：2013

卷　　号：21

期　　号：2

起止页码：115-119

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAS、CSCD、CSCD_E2013_2014、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的探讨内皮型一氧化氮合酶基因启动子区DNA甲基化在同型半胱氨酸致内皮细胞损伤中的作用机制。方法原代培养人脐静脉内皮细胞,加入0、50、100、200、500μmol/L同型半胱氨酸和100μmol/L同型半胱氨酸+维生素B12+叶酸的培养液中孵育72 h。MTT法检测人脐静脉内皮细胞的增殖活性;实时定量PCR测定内皮型一氧化氮合酶mRNA表达;化学比色法测定内皮型一氧化氮合酶活性;硝酸还原酶法检测一氧化氮生成量。巢式降落式甲基化特异性PCR法检测内皮型一氧化氮合酶基因启动子区DNA甲基化改变;同位素法检测DNA甲基化转移酶的活性。结果人脐静脉内皮细胞与不同浓度同型半胱氨酸孵育72 h后,人脐静脉内皮细胞的增殖活性降低,内皮型一氧化氮合酶mRNA表达、内皮型一氧化氮合酶活性和一氧化氮的含量明显下降。内皮型一氧化氮合酶基因启动子序列DNA甲基化程度随同型半胱氨酸浓度的升高而增加,且DNA甲基化转移酶活性升高,而叶酸和维生素B12有一定拮抗作用,与对照组比较差异有显著性(P<0.05和P<0.01)。结论同型半胱氨酸可导致内皮型一氧化氮合酶基因启动子区序列高甲基化修饰,并出现相应的内皮型一氧化氮合酶基因表达下调,这可能是同型半胱氨酸致内皮细胞损伤的重要机制之一。

关 键 词：同型半胱氨酸 内皮型一氧化氮合酶 DNA甲基化

分 类 号：R363]