文献类型：期刊文章

作　　者：钟彦伟[1] 成军[1] 刘妍[1] 董菁[1] 杨继珍[1] 张玲霞[1]

机构地区：[1]解放军第三O二医院传染病研究所基因治疗研究中心,北京100039

出　　处：《中华肝脏病杂志》

基　　金：国家自然科学基金!39900130

年　　份：2000

卷　　号：8

期　　号：3

起止页码：171-173

语　　种：中文

收录情况：CAS、CSCD、CSCD2011_2012、JST、PUBMED、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的在大肠杆菌ＸＬ_１－Ｂｌｕｅ中表达可溶性的抗ＨＣＶ非结构蛋白ＮＳ_３的人源单链可变区抗体（ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ　ｆｒａｇｍｅｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ，ＳＣＦＶ）。方法以重组的 ＨＣＶ ＮＳ_３为抗原，利用噬菌体抗体库技术筛选含有抗－ＨＣＶ ＮＳ_３ ＳＣＦｖ基因的噬菌体克隆。从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒，经ＳｆｉＩ／ＮｏｔＩ酶切鉴定后，亚克隆到ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ载体；转化大肠杆菌ＸＬ_１－Ｂｌｕｅ，提取质粒进行ＤＮＡ序列测定；异丙基硫代－β－Ｄ－半乳糖苷（ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｔｈｉｏ－β－Ｄ－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ，ＩＰＴＧ）诱导表达 ＨＣＶ ＮＳ_３可溶性单链可变区抗体。 ＥＬＩＳＡ和斑点吸印杂交检测其与不同来源的抗原的结合活性。结果筛选到的ＨＣＶ ＮＳ_３的单链抗体基因，经限制性内切酶酶切和序列分析表明，该抗体基因由 ７５０ｂｐ组成， ＥＬＩＳＡ和斑点吸印杂交结果表明，在大肠杆菌 ＸＬＩ-Ｂｉｌｌ６中表达的 ＨＣＶ ＮＳ_３的单链抗体，可与不同来源的ＮＳ_３抗原结合。结论大肠杆菌ＸＬ_Ｉ－Ｂｌｕｅ表达的ＮＳ_３－ＳＣＦＶ具有结合不同来源的ＨＣＶＮＳ３的活性和特异性。

关 键 词：丙型肝炎病毒 单链可变区抗体 NS3蛋白

分 类 号：R394.8]