文献类型：期刊文章

作　　者：乔伟[1] 冯乐平[2] 孙情[2] 熊毅[2] 黎玉凤[2]

机构地区：[1]桂林医学院药学院药学实验教学中心,广西桂林541004 [2]桂林医学院生物技术学院生物技术教研室,广西桂林541004

出　　处：《吉林大学学报（医学版）》

基　　金：国家自然科学基金资助课题(31060161;30860116);广西壮族自治区科技厅科研基金资助课题(桂科自0728230);广西壮族自治区教育厅科研基金资助课题(桂教科研[2010]10号;201010LX325;201010LX326)

年　　份：2012

卷　　号：38

期　　号：6

起止页码：1058-1062

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：目的:构建NOD小鼠CD8α+抗原基因重组慢病毒载体,探讨其在树突状细胞(DCs)中的表达,阐明1型糖尿病(T1DM)的发病机理。方法:设计CD8α+基因特异性引物,从NOD小鼠胸腺淋巴细胞中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增CD8α+基因,与质粒载体pCDF1-MCS2-EF1-COPGFP进行连接重组,经过转化、筛选、鉴定和序列测定后,应用Western blotting法检测CD8α+基因的表达。应用Nanofectin脂质体转染试剂将含有目的基因的质粒转染HEK293细胞,进行重组慢病毒载体包装,将包装后的重组慢病毒颗粒感染DCs,采用Western blotting法检测CD8α+蛋白的表达。结果:成功构建了NOD小鼠CD8α+抗原基因的重组质粒载体,重组表达载体经转染HEK293细胞获得了重组病毒的原液,重组病毒扩增后感染DCs,免疫荧光下可见DCs内含有绿色荧光蛋白(GFP)表达。结论:NOD小鼠CD8α+抗原基因重组病毒载体构建成功,且有相关蛋白表达。

关 键 词：1型糖尿病 CD8α+抗原基因  慢病毒载体 基因克隆  树突状细胞

分 类 号：R392.12]