文献类型：期刊文章

作　　者：姚俊[1] 杨永军[2] 彭海生[3] 陈官国[2] 段国军[2] 鲁富有[3] 李华春[1]

机构地区：[1]云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南昆明650224 [2]云南省丽江市华坪县畜牧兽医站,云南华坪674800 [3]云南省普洱市动物疫病预防控制中心,云南普洱665000

出　　处：《动物医学进展》

基　　金：云南省科技厅农业科技创新工程项目(2008LA019)

年　　份：2012

卷　　号：33

期　　号：7

起止页码：32-39

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CSCD、CSCD_E2011_2012、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为了建立一种灵敏、特异、快速的山羊痘病毒实时定量检测方法,根据山羊痘病毒(AY077835)gp006基因序列,应用Beacon Designer 7.7软件设计合成一对PCR引物。将被检测的目的 DNA片段克隆PEASY-T1质粒,制备重组质粒标准品,以期建立以质粒拷贝数为单位的标准曲线。通过反应条件的优化及引物浓度的筛选,建立了山羊痘病毒SYBR GreenⅠ实时定量PCR(real-time PCR)检测方法,最佳引物浓度为400nmol/L。组内重复试验和组间重复试验变异系数均低于2%,最低检测限为1×101 copies/μL,上机检测时间在1h以内。用该方法对2011年流行于云南华坪、景谷及2003年流行于云南宣威、寻甸和昆明的山羊痘临床组织样品进行定量检测,结果送检组织样品抽提DNA中病毒含量分别为1.03×105、5.30×103、1.51×104、4.74×103、7.20×104 copies/μL。结果表明,所建立的real-time PCR具有灵敏、特异、快速的特点,适合于山羊痘临床组织样品的定量检测。

关 键 词：山羊痘病毒 SYBRGreenⅠ  实时定量PCR

分 类 号：S852.654] Q789[动物医学类]