文献类型：期刊文章

作　　者：王晓丰[1] 薛晖[1,2] 丁正峰[1] 唐建清[1,2] 夏爱军[1,2] 熊怀生[3]

机构地区：[1]江苏省淡水水产研究所,江苏南京210017 [2]国家大宗淡水鱼类产业技术体系南京综合试验站,江苏南京210017 [3]淮安市楚州区水产技术推广站,江苏淮安223001

出　　处：《福建农业学报》

基　　金：国家现代农业产业技术体系建设专项(CARS-46-31)

年　　份：2012

卷　　号：27

期　　号：5

起止页码：465-469

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、普通刊

摘　　要：为更加快速、灵敏地检测草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV),建立环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。根据GenBank中GCRV HZ08等毒株VP6蛋白基因序列设计引物,以GCRV弱毒疫苗株(GCHV-892)总RNA为模板建立RT-LAMP反应,对扩增产物用限制性内切酶PvuⅡ进行酶切鉴定,所得酶切产物大小符合预期值。随后对LAMP反应体系包括Mg2+、dNTPs、甜菜碱(betaine)和内外引物浓度比进行了优化,并以含VP6蛋白基因的重组质粒(pEASY-VP6)为模板考量了该方法的敏感性,结果显示最低检测限为10copies.μL-1,比RT-PCR检测方法敏感10倍。特异性试验表明与白斑综合征病毒(WSSV)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、病毒性神经坏死病毒(VNNV)无交叉反应。应用RT-LAMP方法检测16份疑似出血病草鱼,6份病料获得了阳性扩增,与RT-PCR检测结果一致。

关 键 词：草鱼出血病 呼肠孤病毒 逆转录环介导等温扩增  检测方法  

分 类 号：S917[水产类]