文献类型：期刊文章

作　　者：朱小影[1] 王东[1] 李身锋[1] 张利军[1] 钟梁[1] 冯文莉[1]

机构地区：[1]重庆医科大学检验医学院临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆400016

出　　处：《中国生物制品学杂志》

基　　金：国家自然科学基金(30871102);重庆医科大学优秀博士论文基金(2009年)

年　　份：2012

卷　　号：25

期　　号：7

起止页码：877-880

语　　种：中文

收录情况：AJ、BIOSISPREVIEWS、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的原核表达抗慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)细胞人源化单链抗体(Humanized sin-gle-chain variable fragment,hscFv),并检测其抗原结合活性。方法从重组质粒pUC57-hscFv中扩增hscFv基因,插入含6×His标签的原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a-hscFv,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组融合蛋白经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,SDS-PAGE分析其纯度;Western blot分析其反应原性;间接免疫荧光试验检测其抗原结合活性。结果重组表达质粒经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约为46 000,表达量约占菌体总蛋白的37%,主要以可溶性形式存在;纯化的重组融合蛋白纯度为94%,可与鼠抗6×His单抗及K562细胞表面抗原特异性结合。结论成功原核表达并纯化了抗CML细胞hscFv,为其进一步应用于CML的临床分子诊断和生物靶向治疗奠定了基础。

关 键 词：慢性粒细胞白血病 人源化抗体 原核细胞 基因表达  纯化  

分 类 号：R733.72] R392-33[临床医学类]