文献类型：期刊文章

作　　者：魏道严[1] 糜军[1] 陈诗书[1]

机构地区：[1]上海第二医科大学人类基因治疗研究中心,上海200025

出　　处：《癌症》

基　　金：国家"863"高技术计划基金!(86 3- 10 2 - 45 2 );国家自然科学基金!(3970 44 0 )资助

年　　份：2000

卷　　号：19

期　　号：5

起止页码：399-403

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX1996、CAS、CSA、CSCD、CSCD2011_2012、DOAJ、EMBASE、JST、PUBMED、SCIE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的 :采用细菌内同源重组法高效制备含CD、TK融合自杀基因重组体腺病毒。方法 :CD、TK融合基因CDglyTK自载体 pWZLneoCDglyTK中切出 ,亚克隆至腺病毒穿梭质粒中 ,形成转移质粒 pAdtrackCMV CDglyTK ,将之PmeI酶切线性化后与腺病毒基因组质粒 pAdeasy 1共转化BJ5 183菌 ,抽提重组体腺病毒基因组质粒DNA ,PacI酶切后转染 2 93细胞包装成腺病毒颗粒 ,采用PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定 ,利用报告GFP基因对病毒滴度和感染效率进行测定 ,WesternBlot检测感染腺病毒的肿瘤细胞中有无目的基因的表达。结果 :由pAdTrack CMV CDglyTK和 pAdeasy 1共转化BJ5 183菌 16～ 2 0h后 ,可获得 30 %左右的阳性重组体细菌克隆 ,由重组体克隆质粒DNA转染 2 93细胞包装产生的重组体腺病毒 ,经PCR检测表明已含有目的基因 ,且无复制能力腺病毒的存在。纯化所得腺病毒滴度约为 8× 10 12 pfu/L ,当MOI =10 0时 ,腺病毒感染HepG1细胞的效率 >75 % ,WesternBlot证实在感染重组体腺病毒的细胞中有相应基因产物的表达。结论 :细菌内同源重组法是一种高效、简便、快捷的重组体腺病毒载体制备方法。所制备的Ad CDglyTK在体外能有效表达相应的基因产物 ,为今后的深入研究奠定了基础。

关 键 词：肿瘤 基因治疗 腺病毒载体 CD TK 融合自杀基因

分 类 号：R730.2]