文献类型：期刊文章

作　　者：陈旭[1] 张青松[2] 鞠梅[1] 任发亮[1] 黄丹[1] 齐蓓[1] 陈崑[1] 常宝珠[1] 李新宇[1] 顾恒[1]

机构地区：[1]中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所,南京210042 [2]江苏省常熟市新区医院

出　　处：《中华皮肤科杂志》

基　　金：国家自然科学基金面上项目（30872268）;江苏省自然科学基金（BK2010135,BK2011129）;天津市卫生局科技基金（09KZ52）

年　　份：2012

卷　　号：45

期　　号：7

起止页码：496-500

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、BIOSISPREVIEWS、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的探讨不同剂量中波紫外线（UVB）照射人皮肤成纤维细胞诱导的自噬对细胞凋亡活性的影响。方法人皮肤成纤维细胞来自于23岁健康男性环切术后包皮的原代培养，连续传代培养后取第3～10代的细胞进行实验。通过单丹酰戊二胺（MDC）染色和免疫荧光标记微管相关蛋白1轻链3（LC3）的方法，确定不同剂量3-甲基腺嘌呤（3-MA）对自噬的抑制作用。UVB照射后立即加入0．5mmol／L3-MA孵育细胞4h作为自噬的抑制方法。Hoechst和碘化丙啶（PI）染色结合AnnexinV-异硫氰酸荧光素（FITC）和PI标记细胞后流式细胞仪检测作为细胞凋亡的定性和定量方法。结果0．5mmol／L3-MA能明显抑制人皮肤成纤维细胞自噬活性（饥饿诱导组自噬细胞阳性百分数为63．037％±5．876％，3-MA孵育后下降至34．425％±5．183％）。空白对照组、30、50、100mJ／cm。UVB照射组标记LC3绿色荧光信号逐渐增强，照射后立即对上述4组加入3-MA孵育4h则LC3蛋白表达差异不明显。0．5mmol／L3-MA对细胞活性影响最小。50mJ／cmzUVB照射下加入3-MA孵育较未加3-MA孵育细胞强Hoechst和强PI双染细胞增多；100mJ／cm2UVB照射后加3-MA孵育较未加3-MA孵育细胞强Hoechst和强PI双染细胞减少。AnnexinV—FITC和PI标记细胞后流式细胞仪分析显示，在50mJ／cmzUVB照射下，抑制自噬的细胞中晚期凋亡水平[（10．933±0．839）％]较未抑制细胞[（7．267±0．473）％]上升，两者之间差异具有统计学意义（t=5．20，P〈0．05）；而在100mJ／cmzUVB照射下，抑制自噬的细胞中晚期凋亡水平[（7．100±0．781）％]较未抑制细胞[（10．133±0．681）％]下降，两者之间差异具有统计学意义（t=6．29，P〈0．05）。结论50mJ／cm。UVB照射诱导人皮肤成纤维细胞自噬通过抑制凋亡对细胞起到保护作用，而在100mJ／cm。UVB照射下发生的较高水平自噬可能诱导了自噬．I生细�

关 键 词：紫外线 成纤维细胞 自噬 细胞凋亡  3-甲基腺嘌呤  

分 类 号：R751]