文献类型：期刊文章

作　　者：凌洁[1] 王昊[2] 张帅[2] 张丹丹[2] 来茂德[2] 朱益民[1]

机构地区：[1]浙江大学医学院流行病与卫生统计学系,浙江杭州310058 [2]浙江大学医学院病理学与病理生理学系,浙江杭州310058

出　　处：《浙江大学学报（医学版）》

基　　金：国家科技支撑项目(2009BAI80B02);中央高校基本科研业务费专项资金(2010QNA7022)

年　　份：2012

卷　　号：41

期　　号：3

起止页码：320-326

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAS、CSCD、CSCD_E2011_2012、IC、PUBMED、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:探讨磁珠法提取基因组DNA的影响因素,建立快速、高效、批量提取全血基因组DNA的优化方案。方法:使用磁珠法核酸自动提取系统从全血中提取基因组DNA,紫外分光光度计测定DNA浓度和纯度。采用正交试验设计分析裂解时间、全血量、磁珠量和乙醇浓度4个因素的主效应和全血量与裂解时间、磁珠量,裂解时间与磁珠量的二阶交互作用对所提取DNA浓度和纯度的影响。结果:裂解时间、全血量、磁珠量和乙醇浓度4个主效应对DNA浓度的影响均存在统计学差异(P<0.05),当裂解时间为15 min,全血量为100μl,磁珠量为80μl,乙醇浓度为80%时,DNA平均浓度最高。磁珠量、裂解时间和全血量的交互作用对DNA OD260/OD280的比值有影响(P=0.008和P=0.013)。当磁珠量为40μl,裂解时间为15 min,全血量为100μl时,OD260/OD280的比值较好。磁珠量和乙醇浓度影响DNA OD260/OD230的比值(P=0.017和P<0.05),磁珠量为40μl,乙醇浓度为80%时,OD260/OD230的比值更好。结论:当DNA得率优先考虑时,可以选择裂解时间15 min、全血量100μl、磁珠量80μl、乙醇浓度80%的提取条件;而对DNA纯度要求较高时,可以将磁珠量改为40μl,以获得最优DNA提取效果。

关 键 词：自动化  磁石  DNA/分离和提纯  血液 基因组文库 正交试验 乙醇  细胞,培养的  

分 类 号：R440]