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一步法TaqMan~探针实时荧光定量RT-PCR快速检测PRRSV的建立及初步应用
Development of one-step real-time fluorescent quantitative RT-PCR assay for detection of porcine reproductory syndrome virus strains
文献类型:期刊文章
机构地区:[1]浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江杭州310021 [2]浙江省海盐县畜牧兽医局,浙江嘉兴730070
基 金:浙江省重大科技专项农业项目(2008C12049)
年 份:2012
卷 号:24
期 号:3
起止页码:396-403
语 种:中文
收录情况:BDHX、BDHX2011、CAB、CSCD、CSCD_E2011_2012、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊
摘 要:根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的序列,设计了1对特异性引物和1条TaqMan探针,建立了一步法检测PRRSV的荧光定量RT-PCR方法。结果表明,建立的方法具有较高的特异性,与PCV,JEV,SFV,PRV,PPV无交叉反应;可以检测到10个拷贝数的模板RNA或1个TCID50的PRRSV,比常规RT-PCR方法的灵敏度高10倍;对同一样品进行4次重复试验,变异系数(CV)<1%,具有较好的重复性。应用建立的荧光定量RT-PCR和常规RT-PCR对72份PRRS疑似病例肺组织进行平行检测,结果荧光定量RT-PCR检出40份阳性,高于常规RT-PCR方法(28份阳性)。建立的荧光定量RT-PCR方法特异性好、灵敏度高,而且快速简便,可用于PRRSV的实验室快速诊断和流行病学调查。
关 键 词:猪繁殖与呼吸综合征病毒 实时荧光定量RT-PCR 一步法
分 类 号:S858.28]
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