文献类型：期刊文章

作　　者：周鲁明[1] 刘殿辰[1] 孙欢欢[1] 赵博生[1]

机构地区：[1]山东理工大学生命科学学院发育与进化生物学实验室,淄博255049

出　　处：《遗传》

基　　金：国家自然科学基金项目(编号:31172074);山东省自然科学基金项目(编号:ZR2009DM029)资助

年　　份：2012

卷　　号：34

期　　号：5

起止页码：609-614

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、BIOSISPREVIEWS、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：通过对东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry氨基酸序列比对分析,发现保守的催化三联体结构中第一位的His被Lys所取代。为了探究这种突变是否会对胰蛋白酶的活性有影响,文章构建了原核表达重组质粒pET-28a-Djtry,转化到E.coli BL21中,利用IPTG诱导表达,对表达的重组蛋白进行变性、复性、纯化以及Westernblotting鉴定,获得成分均一的活性蛋白。利用牛胰蛋白酶为标准品,胰蛋白酶特异性底物BAEE,检测Djtry酶活力与比活力。SDS-PAGE电泳表明诱导表达的融合蛋白为包涵体,分子量约为26 kDa,Western blotting结果显示为目的蛋白,对复性纯化的目的蛋白进行酶活检测发现,突变型胰蛋白酶Djtry仍然保持了胰蛋白酶催化性质,但是催化活性相对较弱。

关 键 词：东亚三角涡虫 胰蛋白酶 蛋白表达 酶活

分 类 号：Q55]