文献类型：期刊文章

作　　者：曹蕾[1] 伊瑶[1] 宋敬东[1] 田苗苗[2] 田瑞光[1] 孟庆玲[1] 邱丰[1] 贾志远[1] 毕胜利[1]

机构地区：[1]中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,北京102206 [2]厦门大学材料学院生物材料系生物医学工程中心,厦门361005

出　　处：《病毒学报》

基　　金：国家科技支撑计划(NO.2008BAI69B02)

年　　份：2012

卷　　号：28

期　　号：3

起止页码：201-206

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、BIOSISPREVIEWS、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：将EV71P1和3CD基因片段克隆入同一杆状病毒穿梭质粒Bacmid中,构建出重组杆状病毒表达质粒Bac-mid-P1-3CD;脂质体介导其转染Sf9昆虫细胞获得共表达P1和3CD的重组杆状病毒(AcMNPV-P1-3CD)。用IFA和Western-blot法对表达产物进行鉴定和分析。电镜结果显示P1经3CD切割装配成了大小约为27nm的类球形颗粒(即EV71VLPs)。进一步分析影响杆状病毒表达系统的因素以对表达条件进行优化,结果显示MOI值和时间均可影响目的蛋白的表达,其中时间是主要因素。选择优化后条件利用无血清培养基对贴壁Sf9细胞在多层细胞培养器中进行VLPs的大量表达,密度梯度离心法纯化,SDS-PAGE结果可见三条大小约为39kD、34kD和26kD的VP1、VP0和VP3特异性条带。纯化后EV71VLPs颗粒结构完好,为下一步EV71蛋白结构的基础研究和基因工程疫苗的研究奠定了基础。

关 键 词：杆状病毒 肠道病毒71型(EV71)  病毒样颗粒(VLPs)  制备  鉴定  纯化  

分 类 号：R373.2]