文献类型：期刊文章

作　　者：徐焕洲[1,2] 平芮巾[2] 季汝武[3] 王琳[2] 杨鹏飞[2] 张丽萍[2] 岳启安[1] 胡孔新[2]

机构地区：[1]潍坊医学院,山东潍坊261053 [2]中国检验检疫科学研究院 [3]安徽出入境检验检疫局

出　　处：《中国国境卫生检疫杂志》

基　　金：国家科技重大专项课题(2011ZX10004-001);国家质检总局科研基金项目(2008IK210)

年　　份：2012

卷　　号：35

期　　号：2

起止页码：73-77

语　　种：中文

收录情况：CAS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的应用双启动寡核苷酸引物(Dual Priming Oligonucleotide,DPO)技术建立同时检测日本脑炎病毒(JapaneseEncephalitisVirus,JEV)、黄热病毒(YellowFeverVirus,YFV)、西尼罗病毒(WestNileVirus,WNV)、圣路易斯脑炎病毒(St.Louis encephalitis virus,SLEV)和登革病毒(Dengue virus,DV)5种蚊媒病毒的多重RT-PCR方法。方法利用Primer Premier5.0软件设计5种病毒的特异性DPO引物,对引物浓度、Mg2+浓度和退火温度进行优化,测定多重RT-PCR反应的特异性和敏感性。结果应用DPO引物技术建立的多重RT-PCR方法可特异性扩增JEV、YFV、WNV、SLEV和DV的142 bp、293 bp、377 bp、630 bp和521 bp基因片段,灵敏度分别为5 000 PFU/ml、4 500 PFU/ml、2.3×105copies/μl、2.6×104copies/μl和1.37×104copies/μl,蚊虫模拟添加实验未发生非特异反应。结论应用DPO引物技术建立的针对5种蚊媒病毒的多重RT-PCR检测方法有良好的敏感性和特异性,可以同时对JEV、YFV、WNV、SLEV和DV进行检测。

关 键 词：DPO引物  多重RT-PCR 日本脑炎病毒 黄热病毒 西尼罗病毒 圣路易斯脑炎病毒  登革病毒  

分 类 号：R183.5]