文献类型：期刊文章

作　　者：石艳春[1] 韩堃[2] 郑源强[1] 吴岩[1] 毕力夫[1]

机构地区：[1]内蒙古医学院基础医学院,内蒙古呼和浩特010059 [2]天津医科大学基础医学研究中心

出　　处：《内蒙古医学院学报》

基　　金：教育部"春晖计划"(Z2007-1-01001;Z2007-1-01004);内蒙古自然科学基金(2009MS1102);内蒙古自治区科技计划项目(20080502);内蒙古自治区人才开发基金

年　　份：2012

卷　　号：34

期　　号：2

起止页码：89-93

语　　种：中文

收录情况：普通刊

摘　　要：目的:利用PCR反应从羊布鲁氏菌基因组DNA中克隆omp25基因,并将其构建到原核表达载体pET-32a中。方法:试剂盒法提取羊布鲁氏菌基因组DNA,设计合适的引物,通过PCR反应从基因组中扩增外膜蛋白OMP25的编码基因(omp25)。将得到的基因片段连接到克隆载体pMD19-T的多克隆位点(MCS)中,将连接体pMD19-T-omp25转化感受态大肠杆菌DH5(并进行筛选和克隆扩增,提取质粒并进行酶切分析与序列测定。利用酶切与连接反应将目的基因(omp25)插入载体pET-32a的多克隆位点中,将连接体pET-32a-omp25转化感受态大肠杆菌DH5(并进行筛选和克隆扩增,提取质粒并进行酶切分析。结果:PCR扩增得到的基因片段与GenBank中已公布的羊布鲁氏菌omp25基因同源性为99%。酶切分析结果表明,omp25基因成功地插入载体pET-32a中。结论:成功地扩增得到了羊布鲁氏菌omp25基因并构建了携带该基因的重组原核表达载体pET-32a-omp25,为后续的研究提供了可靠的基础。

关 键 词：羊布鲁氏菌  omp25  原核表达载体 克隆 鉴定  

分 类 号：R392.11]