文献类型：期刊文章

作　　者：常艺海[1] 丛丽娜[1] 卢冬[1] 王红英[1]

机构地区：[1]大连工业大学辽宁省发酵工程重点实验室,大连116034

出　　处：《农业生物技术学报》

基　　金：国家自然科学基金(No.31072224);辽宁省教育厅创新团队项目(No.LT2010012)

年　　份：2012

卷　　号：20

期　　号：4

起止页码：443-450

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、JST、RCCSE、UPD、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为进一步研究海参（Stichopus japonicus）溶菌酶基因（SjLys）（Genbank登录号：EF036468）中不同片段表达产物的生物特性,本研究通过对其cDNA片段的分析,发现C端基因区域所对应的蛋白质序列中含有非酶活性。根据已知的海参溶菌酶的cDNA序列,设计出含有NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点的特异性引物,从新鲜的海参肠中提取总RNA,以其为模板利用RT-PCR扩增出长度为259bp的溶菌酶C端（SjLys-C）基因。将该目的基因连接到pET-32a（＋）载体上,构建重组质粒pET-32a（＋）-SjLys-C,再转化至大肠杆菌（Escherichia coli）Rosetta（DE3）pLysS,成功地构建了重组蛋白SjLys-C的基因工程菌。利用该工程菌诱导发酵,结果显示它能高效表达出26kD左右的重组蛋白SjLys-C。经过Western blot分析,该重组蛋白在26kD左右能够与Penta-His抗体发生特异性免疫反应。对纯化的重组蛋白SjLys-C进行了抑菌特性的分析,结果发现它对溶壁微球菌（Micrococcus lysodeikticus）和副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）有较高的抑菌活性。此外,将该重组蛋白经100℃、40min处理后,其抑菌能力提高了5%~21%。研究结果表明,重组蛋白SjLys-C基因工程菌能够制备出具有可溶性的、并具有抑菌活性的重组蛋白SjLys-C,在农业和医药等行业中有潜在应用和开发价值。

关 键 词：海参溶菌酶  重组蛋白SjLys-C  可溶性蛋白 分离纯化 生物活性

分 类 号：S511]