文献类型：期刊文章

作　　者：张充[1] 周孝伟[1] 吕凤霞[1] 别小妹[1] 陶婷婷[1] 应琦[1] 陆兆新[1]

机构地区：[1]南京农业大学食品科技学院酶工程研究室,江苏南京210095

出　　处：《生物工程学报》

基　　金：南京农业大学青年科技创新基金(No.Y201069);南京农业大学基本科研业务费专项基金(No.KYZ200910);国家自然科学基金(No.31071605)资助~~

年　　份：2012

卷　　号：28

期　　号：4

起止页码：440-456

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2011、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、PUBMED、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：克隆鱼腥藻PCC7120基因组中脂肪氧合酶(ana-LOX)基因,对该功能基因进行了定点突变研究,确定了ana-LOX的最短功能基因长度,构建原核重组表达载体,对重组ana-LOX进行了分离纯化和性质研究。从GenBank中搜索到鱼腥藻PCC7120基因组中含有LOX基因,通过序列分析和比对,发现LOX功能基因位于双功能酶AOS(单加氧酶)-LOX的C端,通过定点突变研究,证实了ana-LOX活性中心位点为His197、His202、His369、Asn373和Ile455。通过逐步缩短基因长度的策略,获得ana-LOX基因的最短功能基因长度为1 254 bp。构建的表达载体pET-32a/ana-LOX转化入BL21(DE3)宿主内,在低温16℃条件下的诱导表达,重组脂肪氧合酶活力可达6 750 U/mL。表达产物通过Ni-NTA亲和柱进行分离纯化,比活达到11.4×104U/mg蛋白,酶活回收率为60.89%。重组ana-LOX最适反应温度45℃,最适反应pH 6.0,在常温下具有较好的稳定性,金属离子Fe2+、Mg2+、Ca2+对该酶存在明显的激活作用,而Fe3+和Cu2+对该酶有强烈的抑制作用。重组ana-LOX能够改善面团的显微结构。该研究获得了高效表达重组ana-LOX,为实现其在食品加工中的应用提供了参考。

关 键 词：重组脂肪氧合酶  克隆表达 定点突变 分离纯化 活性分析

分 类 号：Q943.2[植物生产类]