文献类型：期刊文章

作　　者：柴冉[1] 孙强[1] 邱立友[1]

机构地区：[1]河南农业大学生命科学学院,农业部农业微生物酶工程重点实验室,郑州450002

出　　处：《中国生物化学与分子生物学报》

基　　金：河南省科技攻关项目(No.082102150048)~~

年　　份：2012

卷　　号：28

期　　号：4

起止页码：375-379

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2011、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、JST、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：对多个长片段的基因融合目前仍缺少有效的方法.本文提出一种新的融合PCR策略,即在常规的重叠PCR的第1步和第2步均增加1个降落PCR程序,减少不适当的退火温度和PCR产物3'端额外碱基A对片段融合、扩增的影响,提高正确融合与扩增的效率.结果表明,为构建平菇葡聚糖合成酶启动子的同源重组序列,在4个长度分别是1 015 bp、2 822 bp、2 206 bp和1 008 bp的片段进行融合时,在重叠PCR的第1步加上退火温度61.5℃～57.5℃、每降落0.5℃进行1个循环的降落PCR程序,在重叠PCR的第2步加上退火温度60℃～56℃、每降落0.5℃进行1个循环的降落PCR程序,经过1次PCR即获得顺序正确的全长融合片段.测序结果与4个片段序列的一致性达到98.5%,降落-重叠PCR法对多个长片段的基因融合具有较高的应用价值.

关 键 词：基因融合 重叠PCR 降落PCR 同源重组

分 类 号：Q78]