文献类型：期刊文章

作　　者：罗猛[1,2,3] 朱大兴[1,2] 弓磊[1,2] 邱小明[1,2] 祖玲玲[1,2] 孙丽亚[1,2] 吴志浩[1,2] 周清华[1,2]

机构地区：[1]天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室天津市肺癌研究所 [2]天津医科大学总医院,天津300052 [3]贵州省人民医院胸外科,贵阳550002

出　　处：《中国肺癌杂志》

基　　金：国家自然科学基金重点项目(No.30430300);国家自然科学基金项目(No.30973384);国家"863"重大项目(No.2006AAOZA401);国家"973"重大项目(No.2010CB529405);中瑞国际合作项目(No.09ZCZDSF04100)资助~~

年　　份：2012

卷　　号：15

期　　号：3

起止页码：139-145

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、DOAJ、EMBASE、IC、JST、PROQUEST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：背景与目的 nm23-H1基因是重要的肿瘤转移抑制基因。前期研究发现利用化学合成的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制nm23-H1基因的表达可明显增强肺癌细胞的侵袭力。为了进一步研究nm23-H1基因沉默后的分子生物学机制,本研究利用慢病毒介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)建立nm23-H1基因稳定沉默的肺癌细胞株。方法将表达特异性抑制nm23-H1基因shRNA的慢病毒转染人大细胞肺癌细胞株NL9980和肺腺癌细胞株A549,通过嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株。逆转录PCR、定量PCR及Western blot法检测nm23-H1基因表达,并通过shRNA抵抗的nm23-H1基因重组质粒转染拯救实验验证,侵袭小室实验检测侵袭力改变。结果逆转录PCR、定量PCR和Western blot法检测稳定转染细胞株NL9980-99和A549-99中nm23-H1基因在mRNA和蛋白水平表达均明显降低;shRNA抵抗的nm23-H1基因重组质粒转染拯救实验重现nm23-H1的正常表达;侵袭小室实验显示NL9980-99和A549-99细胞侵袭力明显增强。结论成功建立nm23-H1基因稳定沉默的人大细胞肺癌细胞株NL9980-99和人肺腺癌细胞株A549-99,nm23-H1基因沉默后使NL9980-99和A549-99细胞的侵袭力明显增强。

关 键 词：肺肿瘤 慢病毒 RNA 基因

分 类 号：R734.2]