文献类型：期刊文章

作　　者：王海龙[1] 殷丽天[2] 孟晓丽[1] 申金雁[1] 刘红丽[1] 殷国荣[1]

机构地区：[1]山西医科大学寄生虫学教研室,太原030001 [2]山西医科大学生理学系,太原030001

出　　处：《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》

基　　金：Supported by the National Natural Science Foundation of China(No.81071374)~~

年　　份：2012

卷　　号：30

期　　号：1

起止页码：27-31

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、JST、PUBMED、SCOPUS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：目的克隆、表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株棒状体蛋白17(TgROP17)基因,并分析其抗原性。方法制备弓形虫RH株速殖子总RNA,根据TgROP17基因全长编码序列(GenBank登录号为AM075203.1)的开放阅读框设计引物并进行逆转录PCR(RT-PCR)扩增,扩增产物经双酶切后连接入pGEX-6P-1载体,重组质粒转化大肠埃希菌(E coli)DH5α,阳性菌落经PCR和双酶切鉴定,并测序。将重组质粒pGEX-6P-1-TgROP17转化至E.coli Rosetta(DE3)并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。分别以兔抗弓形虫血清和抗谷胱甘肽S转移酶(GST)标签抗体为一抗,采用蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白及其抗原性。结果 RT-PCR扩增产物约为1850 bp。菌落PCR、双酶切及测序结果显示重组质粒pGEX-6P-1-TgROP17构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(M_r)约96 000的可溶性重组蛋白。Western blotting结果表明,诱导表达的蛋白质为带GST标签的重组蛋白,且能被兔抗弓形虫血清识别。结论获得刚地弓形虫重组ROP17蛋白,且具有抗原性。

关 键 词：刚地弓形虫 棒状体蛋白17  原核表达 抗原性

分 类 号：R382.5]