文献类型：期刊文章

作　　者：赵凯[1,2] 孙立新[3] 孙宇石[1] 周东坡[1,2]

机构地区：[1]黑龙江大学生命科学学院,微生物黑龙江省高校重点实验室,哈尔滨150080 [2]农业微生物技术教育部工程研究中心,哈尔滨150500 [3]黑龙江大学校医院,哈尔滨150080

出　　处：《中国新药杂志》

基　　金：国家自然科学基金(30970090);黑龙江省普通高等学校新世纪优秀人才培养计划(1251-NCET-005);哈尔滨市科技创新人才研究专项基金(2010RFQXS043);黑龙江大学高层次人才(创新团队)支持计划(Hdtd 2010-17)

年　　份：2012

卷　　号：21

期　　号：4

起止页码：436-442

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAS、CSCD、CSCD_E2011_2012、EMBASE、IC、IPA、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:制备抗紫杉醇单克隆抗体并建立间接ELISA检测方法。方法:用琥珀酸酐法将紫杉醇(taxol)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制成全抗原taxol-BSA,采用紫外波长扫描法和薄层层析检测法对合成抗原进行鉴定;以taxol-BSA免疫Blab/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0进行融合,经间接ELISA法筛选、融合细胞有限稀释法克隆、克隆化杂交瘤细胞株的亚类鉴定等筛选出单克隆抗体杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的特异性进行鉴定;用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化腹水。同时,对间接ELISA法反应条件进行了优化。结果:获得了3株能稳定分泌抗紫杉醇单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为taxol-A1,taxol-A2和taxol-A3;taxol-A3株腹水效价为1∶128 000,属于IgG2b亚型;建立的间接ELISA法检测条件为15μg.mL-1抗原、4℃包被过夜、1%BSA封闭1 h,PBS做抗体稀释液,单抗反应时间为30 min,酶标二抗作用时间1 h,10%浓硫酸终止反应。结论:获得了特异性的抗紫杉醇单克隆抗体并建立了间接ELISA检测方法。本研究制备的抗紫杉醇单克隆抗体及建立的间接ELISA检测方法,为从内生真菌生物合成紫杉醇发酵液中迅速、高效地分离纯化和检测紫杉醇奠定了基础。

关 键 词：紫杉醇 内生真菌 taxol-BSA  抗紫杉醇单克隆抗体  酶联免疫吸附试验

分 类 号：R979.1]