文献类型：期刊文章

作　　者：代卉[1] 黄宏[3] 王莎莉[1] 徐祥[3] 简宇[3] 崔文慧[2] 张猛[3] 张波[3] 蒋建新[3]

机构地区：[1]重庆医科大学基础医学院神经科学研究中心,400016 [2]重庆医科大学基础医学院生理教研室,400016 [3]第三军医大学大坪医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

出　　处：《中华烧伤杂志》

基　　金：基金项目：国家重点基础研究发展计划（2012CB518105）;国家自然科学基金（30871025）;创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室自主研究课题（SKLZZ200907）;重庆市自然科学基金（CSTC,2010BB5036）

年　　份：2012

卷　　号：28

期　　号：1

起止页码：19-24

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的 观察TNF-α在血管内皮细胞向间质细胞转化中的作用,探讨纤维化疾病发生的机制. 方法 取健康胎儿脐带,体外酶消化法分离培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,用免疫荧光法进行鉴定.取第3～5代对数生长期HUVEC分别接种于12孔板和6孔板中,均按随机数字表法分为6组：对照组,培养液中不加任何刺激因素；5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组,分别在培养液中添加相应终浓度TNF-α,每组3个样本.培养72 h后倒置相差显微镜下观察各组细胞形态；免疫荧光法检测12孔板中各组细胞凝血因子Ⅷ和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,计算2种因子双阳性细胞数比值及吸光度值比值；RT-PCR检测6孔板中各组细胞钙黏蛋白、α-SMA和Ⅰ型胶原mRNA的表达（以灰度值比值表示）.对数据行单因素方差分析及LSD检验. 结果（1）原代培养HUVEC为圆形、短梭形或扁平形,传代后细胞呈铺路石样旺盛生长.经第1、2、3、4、5次传代后HUVEC凝血因子Ⅷ阳性表达率分别为（85.5±1.8）％、（88 1±5 0）％、（93.6±3.7）％、（92.9±4 8）％、（89.5±1.1）％,明显高于原代培养HUVEC的（81.4±3.8）％,F值均为7.481,P值均小于0.05.（2）对照组细胞呈圆形、短梭形或扁平形,细胞间连接紧密；5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组随着TNF-α浓度的增加,细胞形态逐渐向长梭形转变,细胞间连接减少、间隙变大.（3）对照组中凝血因子Ⅷ、α-SMA双阳性细胞数比值和吸光度值比值分别为0.055±0 015、0.078±0 017,均显著低于5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组的0 257±0.106、0 280±0.129、0.505±0 059、0.817±0.035、0.929±0.101和0.437±0 040、0 456±0.097、0 496±0.082、0.787±0 131、0.885±0 087,F值分别为45 009、50.099,P值均小于0.01.（4）5、10、25、50、100 ng/mL TNF-α组细胞中钙黏蛋白mRNA水平分别为0.70±0.05、0.63±0 06、0 60±0.10、0.45±0.16、0 26±0.14,后4组显著低于对照组的0 8

关 键 词：肿瘤坏死因子Α 内皮细胞 间质细胞 细胞转分化 肌成纤维细胞

分 类 号：R363]