文献类型：期刊文章

作　　者：汪雅雯[1] 王焕焕[1] 杨广超[1] 单含文[2] 谢先文[2] 赵健[1] 张惠展[1]

机构地区：[1]华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海200237 [2]浙江日升昌药业有限公司,浙江东阳322100

出　　处：《食品与药品》

基　　金：浙江省科技厅重大科技专项重大社会发展项目(2009C03004)

年　　份：2012

卷　　号：14

期　　号：1

起止页码：8-11

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、CSA-PROQEUST、IC、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的构建apoptin(凋亡素)-HBDCK-pET28a突变体重组表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现高效可溶性表达,并观察突变后穿膜肽(CPP)在HeLa细胞中的转导活性。方法采用PCR介导突变方法将重组蛋白apoptin-HBD及EGFP-HBD的HBD结构域中的Cys(C)突变为Lys(K)。突变的重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化目的蛋白,进一步观察HeLa细胞突变后HBD的转导活性。结果经双酶切鉴定和序列分析,突变后的重组质粒apoptin-HBDCK-pET28a及EGFP-HBDCK-pET28a构建正确。转化E.coli BL21(DE3)后,融合蛋白均获得可溶性表达。EGFP-HBDCK作用于HeLa细胞13 h后,可观察到细胞内强绿色荧光。结论 HBD结构域中C突变为K,可达到融合蛋白可溶性表达的目的,且仍能保持很强的转导活性,可携带EGFP蛋白进入HeLa细胞。

关 键 词：突变HBD  可溶性表达 凋亡素

分 类 号：Q591.2]