文献类型：期刊文章

作　　者：朱梦瑜[1] 高星杰[2] 钱宝鑫[1] 葛林[3] 赵虹[1] 赵秀娟[1] 杨洁[2,3]

机构地区：[1]天津医科大学免疫教研室,300070 [2]天津医科大学基础医学研究中心 [3]天津医科大学生化教研室

出　　处：《天津医药》

基　　金：国家科技部"863"项目(项目编号:2007AA02Z115);国家自然科学基金资助项目(项目编号:30970582);天津市应用基础研究计划项目(项目编号:07JCZDJC07300)

年　　份：2011

卷　　号：39

期　　号：11

起止页码：990-992

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、IC、JST、PUBMED、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:将人类G3BP(Ras-GTPase activating protein SH3 domain binding protein)蛋白Domain(1～5)基因片段分别定向连入pEGFP-C2质粒,使G3BP蛋白各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法:以重组质粒pEGFP-C1-G3BP为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切法将目的片段连接到pEGFP-C2载体上,再将构建成功的pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)重组质粒转染入HeLa细胞内,以荧光显微镜及Western印迹法检测绿色荧光蛋白与目的蛋白的融合表达情况。结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜及Western印迹结果均检测到绿色融合蛋白的表达。结论:重组pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)质粒成功构建并表达。

关 键 词：绿色荧光蛋白质类 质粒 基因表达  印迹法,蛋白质  重组融合蛋白质类 限制性内切酶图谱法  

分 类 号：R382.5]