文献类型：期刊文章

作　　者：周松峰[1,2] 廖文军[3] 袁书智[3] 覃绍敏[1] 白安斌[1] 吴健敏[1] 陆芹章[2]

机构地区：[1]广西兽医研究所,南宁530001 [2]广西大学动物科学技术学院,南宁530005 [3]北京博莱得利生物技术有限责任公司,北京100850

出　　处：《南方农业学报》

基　　金：广西基本科研业务费专项项目(桂科专项11-4)

年　　份：2011

卷　　号：42

期　　号：10

起止页码：1276-1279

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、CSCD、CSCD_E2011_2012、FSTA、IC、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、普通刊

摘　　要：【目的】对狂犬病毒Rmg基因进行克隆、表达、纯化及复性,以期获得表达量高、反应原性好的Rmg蛋白,为研制快速、直观、简便检测狂犬病毒抗体的胶体金试纸条奠定基础。【方法】用常规PCR从狂犬病毒基因组中克隆出狂犬病毒G蛋白的主要抗原表位基因Rmg,并将其插入原核表达载体pET-Trx中,构建原核表达质粒pET-Trx-Rmg,将pET-Trx-Rmg转化BL21(DE3)plysS,在IPTG诱导下进行表达。【结果】SDS-PAGE分析结果表明,Rmg基因在BL21(DE3)plysS中获得高效表达,表达量占菌体总蛋白的30.5%左右,并主要以不溶的包涵体形式存在,分子量约为51.7kDa。将表达的蛋白以亲和层析法进行纯化并通过谷胱甘肽还原法进行复性,纯化后蛋白纯度达99.1%。经Western blotting检测,发现表达的Rmg蛋白能够与狂犬病毒高免血清发生特异反应,但与犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)阳性血清不发生反应。【结论】Rmg蛋白具有良好的抗原性,可用于研制检测狂犬病毒抗体的胶体金试纸条。

关 键 词：狂犬病病毒 Rmg基因  原核表达 纯化  

分 类 号：S852.655]