文献类型：期刊文章

作　　者：李煌元[1] 汤章彬[1] 吴思英[2] 林炜[1] 王章敬[1]

机构地区：[1]福建医科大学公共卫生学院环境与健康研究所职业与环境卫生学系,福建福州350004 [2]福建医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系

出　　处：《中国公共卫生》

基　　金：国家自然科学基金(30800936);福建省环境与健康重点学科基金(GW-10);福建省教育厅(JA07084)

年　　份：2011

卷　　号：27

期　　号：9

起止页码：1116-1118

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAS、CSCD、CSCD_E2011_2012、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的利用真核表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP miR载体构建针对人Nrf2基因的微小RNA（microR-NA）真核表达载体,为研究Nrf2基因在化学物毒作用提供参考依据。方法设计特异性针对Nrf2基因的寡核苷酸序列,构建重组载体并命名为pcDNA-Nrf2-A、pcDNA-Nrf2-B、pcDNA-Nrf2-C、pcDNA-Nrf2-D,转染人乳腺癌MCF-7细胞;通过荧光显微镜观察绿色荧光监测转染效率,转染48 h后用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫细胞化学检测瞬时转染细胞Nrf2基因mRNA和蛋白的表达变化观察沉默作用来初筛有效的重组载体。结果成功构建miRNA真核表达载体pcDNA-Nrf2;转染效率约为20%~40%;瞬时转染重组质粒48 h后,与空白对照和阴性对照质粒比较,pcDNA-Nrf2-A Nrf2 mRNA表达差异无统计学意义（P〉0.05）;pcDNA-Nrf2-B、pcDNA-Nrf2-C、pcD-NA-Nrf2-D mRNA表达降低,差异有统计学意义（P〈0.001）,pcDNA-Nrf2-C抑制Nrf2基因mRNA表达强于pcDNA-Nrf2-D（P〈0.05）。结论成功构建了Nrf2的microRNA表达载体pcDNA-Nrf2-C,可作为进一步研究Nrf2基因功能的工具。

关 键 词：NRF2 微小RNA 真核表达载体 人乳腺癌细胞株MCF-7  

分 类 号：R114]