文献类型：期刊文章

作　　者：郑道山[1,2] 冯冲[2] 朱彦宾[2,3] 龙川[2] 冯书堂[2] 潘登科[2] 马文丽[1]

机构地区：[1]南方医科大学基因工程研究所,广东广州510515 [2]中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193 [3]甘肃农业大学动物科学技术学院,甘肃兰州730070

出　　处：《生物技术通讯》

基　　金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2010jc-7-4);国家重大专项(2008ZX08006-003)

年　　份：2011

卷　　号：22

期　　号：4

起止页码：458-462

语　　种：中文

收录情况：CAS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的:获得α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除的五指山小型猪胎儿,为异种器官移植研究提供基础平台。方法:以新霉素磷酸转移酶基因(neo)为筛选标记基因构建启动子缺陷型打靶载体,打靶载体线性化后用电转染法将其导入胎儿成纤维细胞中,转染后的细胞经G418筛选后,用PCR法检测药物抗性的细胞克隆,对阳性细胞进行核移植构建重构胚胎及胚胎移植。结果:转染后,经筛选共得到176个具有G418抗性的细胞克隆,经PCR检测,其中2个细胞克隆发生了同源重组;以其中1个GGTA1+/-细胞克隆为供体细胞进行核移植,将重构胚移植到2头自然发情的受体母猪中,1头受体妊娠;第37 d将代孕母猪处死,获得2个胎儿,经PCR和Southern印迹鉴定,均为GGTA1单等位基因敲除胎儿。结论:构建了五指山小型猪GGTA1基因部分外显子4区域敲除的启动子缺陷型打靶载体,获得了GGTA1单等位基因敲除的胎儿,为培育GGTA1基因敲除的五指山小型猪奠定了基础。

关 键 词：五指山小型猪 基因敲除 GGTA1基因  胎儿成纤维细胞

分 类 号：Q78]