文献类型：期刊文章

作　　者：杨晓强[1] 赵亚刚[2] 孙大勇[2] 姜泊[3] 陈学清[4]

机构地区：[1]中国人民解放军75600部队医院综合科 [2]广州军区广州总医院消化内科 [3]南方医科大学南方医院消化内科 [4]广州医学院第一附属医院消化内科

出　　处：《广东医学》

基　　金：国家自然科学基金自由申请面上项目(编号:30570839);广东省自然科学基金资助项目(编号:05004735);广东省教育部产学研结合项目(编号:2009B090300354)

年　　份：2011

卷　　号：32

期　　号：13

起止页码：1644-1647

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAS、CSCD、CSCD_E2011_2012、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建破伤风毒素C片段(TETC)乳链菌表达载体,并验证其生物活性。方法将采用基因拼接方法获得的TETC基因从测序正确的质粒pBS-TETC上以SalⅠ、HindⅢ切下,分别定向连接到以XhoⅠ、HindⅢ酶切的质粒分泌表达的乳链菌表达载体pNBC1000和膜锚定表达的乳链菌表达载体pNBC2000。电穿孔转化乳链菌,分别提取分泌蛋白及膜锚定蛋白,通过蛋白电泳及Western blot检测蛋白定位表达情况。结果构建了分泌表达及锚定表达TETC的乳链菌表达载体pNBCL1002与pNBCL2002,电穿孔转化乳链菌获得了分泌表达及膜锚定表达TETC的乳链菌,SDS-PAGE分析显示分泌表达的TETC大小约为57.8 kD,表达量占总体蛋白的8.06%、上清蛋白的9.82%,锚定表达的TETC大小约为73.5 kD的表达蛋白,表达量占总体蛋白的10.7%、膜蛋白的17.9%;Western blot检测显示所表达的TETC均可与破伤风抗毒素血清发生免疫印迹。结论成功构建了TETC乳链菌表达载体并在乳链菌内表达TETC,初步验证了表达的TETC的免疫反应性,这一结果可能为进一步研究生物佐剂及防治破伤风疫苗奠定基础。

关 键 词：破伤风毒素C片段  乳链菌  生物佐剂  疫苗

分 类 号：R392-33]