文献类型：期刊文章

作　　者：邹淑梅[1] 于在江[1] 张烨[1] 辛丽[1] 陈永坤[1] 陈禹保[2] 陈清轩[2] 舒跃龙[1]

机构地区：[1]中国疾病控制中心病毒病预防控制所,北京100052 [2]北京标凯科技有限公司,北京100094

出　　处：《实验动物科学》

基　　金："十一五"国家科技支撑计划(No.2006BAD06A15)

年　　份：2011

卷　　号：28

期　　号：3

起止页码：1-5

语　　种：中文

收录情况：JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的克隆、表达和鉴定禽流感病毒H5N1血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法在成功克隆禽流感病毒H5N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMET A/HA(49～1 587 bp)、pMET A/NA(121～1 200 bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论本研究成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1 HA、NA基因序列,为禽流感病毒H5N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供了依据。

关 键 词：禽流感病毒H5N1  血凝素 神经氨酸酶 真核酵母表达  

分 类 号：Q939.47]