文献类型：期刊文章

作　　者：许发芝[1] 吴胜国[2] 刘雪兰[1] 余为一[1]

机构地区：[1]安徽农业大学安徽省人兽共患病学重点实验室,合肥230036 [2]安徽安丰堂动物药业有限公司,合肥230036

出　　处：《畜牧兽医学报》

基　　金：安徽农业大学校青年基金项目(2010zd06);国家自然基金项目(30671537)

年　　份：2011

卷　　号：42

期　　号：5

起止页码：721-728

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSA、CSCD、CSCD2011_2012、DOAJ、EMBASE、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：本研究旨在探明鸡恒定链跨膜区特定氨基酸在形成MHCⅡ-Ii复合物聚合中的作用特征。用大引物PCR定点突变法将鸡Ii链跨膜区2个氨基酸Gln47和Thr50分别突变为丙氨酸(Ala),再连接到pEGFP-C1载体中,构建含Ii-GFP融合基因的真核表达载体。同时还分别构建了含pDsRed2-N1-MHCⅡα、pDsRed2-N1-MHCⅡβ、pEG-FP-N1-MHCⅡα和pEGFP-N1-MHCⅡβ真核表达载体。用脂质体介导法将这些重组质粒单独或共转染至COS-7细胞,培养48h后经荧光显微镜检测野生型Ii和突变型Ii与MHCⅡ类分子的细胞定位,并通过免疫共沉淀研究它们之间的相互关系。结果显示,野生型Ii链与MHCⅡα或MHCⅡβ之间存在细胞内的共定位,而突变型Ii与MHCⅡα或MHCⅡβ在细胞中共表达后未出现共定位现象。免疫共沉淀结果显示,在野生型Ii链与MHCⅡα或(和)MHCⅡβ单转染或三者共转染COS-7细胞后,均能检测到MHCⅡα-Ii、MHCⅡβ-Ii和MHCⅡ-Ii复合物,而突变型Ii链与MHCⅡα或(和)MHCⅡβ单转染或三者共转染COS-7细胞后,均检测不到MHCⅡα-Ii、MHCⅡβ-Ii和MHCⅡ-Ii复合物。因此Ii链跨膜区Gln47和Thr50 2个氨基酸对于MHCⅡ-Ii复合体的形成是至关重要的。

关 键 词：突变体  MHCⅡ类分子  恒定链  共定位 免疫沉淀

分 类 号：S852.4]