文献类型：期刊文章

作　　者：韩猛立[1,2] 黄新[1] 何延华[1] 宋天增[1,2] 薄新文[1] 钟发刚[1]

机构地区：[1]新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室,石河子832000 [2]石河子大学动物科技学院,石河子832003

出　　处：《农业生物技术学报》

基　　金：国家重点基础研究发展规划(973)前期研究专项(No.2008CB117017);国家自然基金项目(No.30960286);兵团博士资金项目(No.2007JC15);新疆农垦科学院青年科学基金项目(No.YQJ201113)共同资助

年　　份：2011

卷　　号：19

期　　号：3

起止页码：521-529

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、JST、RCCSE、UPD、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：建立检测牛Toll样受体(TLRs)mRNA表达水平的SYBR GreenΙ实时荧光定量PCR方法。根据GenBank中BoTLR-2、3、4、5、7、8和10的基因序列,在其保守区设计并合成各自特异性引物,以牛3-磷酸甘油脱氢酶基因(GAPDH)为内参,建立实时荧光定量PCR方法。结果表明,在1×102～1×109copies/μL范围内,BoTLRs和GAPDH基因的Ct值与阳性质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991。溶解曲线分析表明,产物为特异的单峰,具有较高的灵敏度和特异性。重复性结果表明,TLRs和GAPDH基因阳性质粒,最小检出浓度达到100和10copies/μL,组内、组间变异系数值均保持在3.5%以内。临床样品检测结果表明,TLR3和TLR8mRNA水平在诱导培养早期较高,在4h达到高峰,而TLR4和TLR7水平与之相反,在诱导培养后期较高,在24h达到高峰,表明本研究所建立的检测方法成功用于临床样品的检测,为在mRNA水平对BoTLRs的定量分析提供技术平台。

关 键 词：牛  TOLL样受体 外周血单核细胞 实时荧光定量RT-PCR SYBR-GreenⅠ  

分 类 号：S858.23]