文献类型：期刊文章

作　　者：胡熔[1,2] 刘大岭[1,3] 谢春芳[1,3] 姚冬生[1,4]

机构地区：[1]暨南大学微生物技术研究所,广州510632 [2]广州科仁生物工程有限公司,广州510600 [3]广东省生物工程药物重点实验室,广州510632 [4]暨南大学基因工程药物国家工程研究中心,广州51063

出　　处：《中国生物工程杂志》

基　　金：国家“863”计划资助项目(2005AA213010)

年　　份：2011

卷　　号：31

期　　号：4

起止页码：71-76

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、IC、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:应用原核表达系统对黄曲霉毒素解毒酶(aflatoxin-detoxifizyme,ADTZ)进行高效可溶表达和纯化,并对其进行生物学活性与二级结构分析。方法与结果:亚克隆ADTZ的成熟肽,并构建与pMAL-c2x的重组质粒,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导实现了MBP_ADTZ融合蛋白的高效可溶表达,其表达量约占总蛋白的50%。经Amylose亲和层析、Factor Xa酶切和疏水层析后得到高纯度的rADTZ蛋白。生物学活性分析表明rADTZ蛋白具有降解AFB1的酶活性,酶比活为136U/mg。圆二色光谱对rADTZ蛋白二级结构的分析结果为:α-螺旋为43.3%、β-折叠为31.1%、β-转角为10.5%和无规则卷曲为15.1%。结论:用大肠杆菌成功表达并得到高纯度有活性的rADTZ蛋白,为进一步对rADTZ结构与功能研究奠定了基础。

关 键 词：黄曲霉毒素解毒酶 MBP_ADTZ融合蛋白  可溶性表达 圆二色谱

分 类 号：Q786]