文献类型：期刊文章

作　　者：王彦彬[1] 孙向丽[1] 魏战勇[1] 陈红英[1] 杨明凡[1] 崔保安[1]

机构地区：[1]河南农业大学牧医工程学院/河南省动物性食品安全重点实验室,河南郑州450002

出　　处：《中国农业科学》

基　　金：国家"十一五"科技支撑计划专项(2006BAD06A08)

年　　份：2011

卷　　号：44

期　　号：9

起止页码：1931-1938

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、FSTA、GEOBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：【目的】制备复合型猪干扰素α和γ进行应用抗病毒研究。【方法】本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将编码猪干扰素α和γ成熟蛋白基因插入供体质粒pFastBacDual,分别置于PH和P10启动子控制下,引入蜂素信号肽(honeybee melittin signal peptide,HBM)基因取代猪干扰素α和γ原有信号肽基因以实现分泌型表达,并在C端分别融合6个组氨酸标签以利于纯化。将构建质粒转化DH10感受态细胞进行同源重组,获得重组穿梭质粒Bacmid,转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。重组杆状病毒感染昆虫细胞,鉴定重组蛋白的活性。【结果】通过间接免疫荧光、Western-blot证明猪干扰素α和γ重组蛋白在重组杆状病毒感染的昆虫细胞中均获得表达,表达产物主要分布在培养上清中。通过在猪肾细胞(PK-15)上抑制水泡性口炎病毒(VSV)致病变作用检测重组蛋白的抗病毒活性,结果表明:昆虫细胞上清的抗病毒效价达到3.24×107 U.mL-1。在Marc-145细胞,昆虫细胞上清经2-11稀释能够抑制100个TCID50的PRRSV的致细胞病变作用。【结论】应用杆状病毒表达系统实现猪干扰素α和γ在昆虫细胞上分泌共表达,重组蛋白在细胞上对PRRSV具有抑制作用。

关 键 词：猪  干扰素 杆状病毒 表达  繁殖与呼吸综合征病毒

分 类 号：S858.28]