文献类型：期刊文章

作　　者：马秋敏[1] 张雅丽[1] 刘金娜[1] 车英慧[1] 谢寒丁[1] 罗云波[1] 曲桂芹[1]

机构地区：[1]中国农业大学食品科学与营养工程学院食品生物技术实验室,北京100083

出　　处：《农业生物技术学报》

基　　金：中央高校基本科研业务费专项资金(No.2009-1-83);国家公益性行业(农业)科研专项(No.200803033-B0602-03);国家自然科学基金(No.30500352)共同资助

年　　份：2011

卷　　号：19

期　　号：2

起止页码：258-262

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、JST、RCCSE、UPD、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为获得可溶性的番茄Metacaspase蛋白,后续研究Metacaspase蛋白的酶学特性以及功能,利用RT-PCR方法克隆了番茄(Lycopersicon esculentum)中Metacaspase(LeM)全长cDNA,并成功地构建了LeM基因的原核表达载体重组质粒pET28a-LeM,转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)PlysS和Rosetta中进行诱导表达,并对诱导表达条件进行了优化。SDS-PAGE结果显示,在37℃条件下,1mmol/L IPTG诱导表达量最高,在BL21(DE3)PlysS菌株中重组蛋白主要以包涵体形式存在,而相同条件下在Rosetta菌株中多为可溶性表达。同时酶活测定显示,Rosetta上清中LeM的活性为33RFU/min,显著高于BL21(DE3)PlysS 7RFU/min。本实验表明,不同菌株对Metacaspase的可溶性表达有很大影响。

关 键 词：番茄 METACASPASE 基因克隆  原核表达

分 类 号：S641.2]