文献类型：期刊文章

作　　者：杨华[1] 张丽婷[1] 李连青[2] 杨焕森[1] 刘忠华[1] 崔振玲[1] 王洁[1] 陆俊梅[1] 胡忠义[1]

机构地区：[1]同济大学医学院附属上海市肺科医院上海市结核病(肺)实验室,200433 [2]山西省临床检验中心2

出　　处：《中华结核和呼吸杂志》

基　　金：国家“十一五”重大专项资助项目（2008ZXlO003-003q）2）;上海市科学技术委员会资助项目（09ZRl425800）

年　　份：2011

卷　　号：34

期　　号：3

起止页码：192-196

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、BIOSISPREVIEWS、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的应用噬菌体展示随机7肽文库，筛选MTB标准株H37Rv的结合肽，并初步鉴定其与MTB的结合能力。方法以H37Rv灭活菌体为靶分子，应用噬菌体展示随机7肽文库进行筛选，并于第2～4轮的筛选中加入耻垢分枝杆菌灭活菌体进行反筛，经4轮生物淘选后，随机选取单噬菌体进行测序，间接酶联免疫吸附测定（ELISA）法鉴定阳性克隆。将亲和性最强的阳性单噬菌体所展示的短肽进行体外合成及荧光标记，观察其与16种分枝杆菌标准株及3种非分枝杆菌（铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌）的结合活性。结果通过4轮生物淘选，能与靶分子特异性结合的噬菌体得到明显富集。单噬菌体测序分析共获得5种共同序列。间接ELISA检测出5个单噬菌体均为阳性克隆，其中单噬菌体H8与H37Rv及耻垢分枝杆菌的亲和性均较强。荧光显微镜下观察到，荧光标记H8可与H37Rv结合，与包括耻垢分枝杆菌在内的其他15种分枝杆菌有一定亲和力，而与3种非分枝杆菌均不结合。结论利用噬菌体展示随机肽库技术淘选可获得MTB标准株H37Rv的结合肽，与MTB的结合活性及特异度较高，这为以标记肽为基础探索新的MTB体外检测方法提供了思路。

关 键 词：分枝杆菌 结核 肽库 细菌噬菌体

分 类 号：R378]