文献类型：期刊文章

作　　者：王江岭[1] 张建成[2] 顾建锋[1]

机构地区：[1]宁波出入境检验检疫局技术中心,浙江宁波315012 [2]嘉兴出入境检验检疫局

出　　处：《植物检疫》

基　　金：国家质量监督检验检疫总局科技项目(2010IK269);宁波市农业科研攻关合作项目(2008C10014);宁波市自然科学基金项目(2010A610018)

年　　份：2011

卷　　号：25

期　　号：2

起止页码：32-35

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：大量线虫DNA的提取可能因线虫不纯而受到污染,溶液多次转移造成DNA损失,并且在提取过程中加入过多的溶质离子也可能对PCR扩增有干扰,从而影响下一步的研究。本研究用液氮快速冷冻单条线虫,继以85℃快速变温,用温度的剧烈变化使线虫裂解,再以蛋白酶K降解蛋白质,提高了获得的DNA的纯度和数量。通过多种线虫的验证试验表明,该方法高效、快速、稳定。该试验方法有如下优点:(1)使用Taq酶附带的PCR Buffer代替WLB裂解液和SDS裂解液,减少了配置的不确定性和外来离子的影响。(2)整个提取过程在一个PCR管中完成,并可直接用于PCR扩增,没有溶液的转移和过多的溶质添加,减少污染和对后续PCR的影响。(3)使用变温处理代替其他手工破碎方法,减少了外界污染物的掺入,不需要手工操作技巧。与另外2种提取线虫DNA的蛋白酶K方法相比,本研究提取单条线虫DNA的时间短,效率高,PCR扩增结果稳定可靠,符合快速检测的需求;此外,本研究所使用的方法降解单条线虫蛋白质彻底,提取DNA数量多,稀释32倍仍能扩增出明显的条带,可进行多次分子试验研究。

关 键 词：线虫 DNA提取 方法优化  蛋白酶K  温度

分 类 号：S432.45]