文献类型：期刊文章

作　　者：冯爱花[1] 陈宗梅[1] 李静[1] 程备久[1] 范军[1]

机构地区：[1]安徽农业大学生命科学学院/安徽省作物生物学重点实验室,安徽合肥230036

出　　处：《核农学报》

基　　金：转基因生物新品种培育重大专项(No.2009ZX0810-002B);国家自然科学基金(No.30840018);安徽省攻关课题(No.0701302137)

年　　份：2011

卷　　号：25

期　　号：1

起止页码：62-66

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：叶绿体铁氧还蛋白(Fd)通过活性中心的铁硫簇传递还原力,在各种氧化还原途径中起重要作用。本研究中,氨基酸序列比对显示玉米中5种Fd的叶绿体导肽同源性很低,而去除导肽的成熟蛋白氨基酸序列具有很高的同源性。采用RT-PCR技术从玉米幼叶总RNA中克隆了编码成熟Fd1的基因,并分别插入pQE 80和p28SUMO表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达的N端含有组氨酸标签的Fd1(His-Fd1),和含有组氨酸标签的小类泛素修饰蛋白(SUMO)的Fd1(HisSUMO-Fd1),用Ni-NTA层析介质亲和纯化,SDS-PAGE显示纯化的His-Fd1为一条带,亚基分子量约12kD。纯化的HisSUMO-Fd1用专一性蛋白酶Ulp除去HisSUMO,获得纯化的Fd1。紫外可见光谱扫描显示纯化的HisSUMO-Fd1溶液在315nm、415nm和459nm有特异吸收峰,电子顺磁共振波谱分析表明Fd1中存在[2Fe-2S]。SDS-PAGE显示多种玉米幼叶可溶性蛋白被固定化的His-Fd1吸附。

关 键 词：铁氧还蛋白(Fd)  Fd1  玉米  重组表达  纯化 铁硫簇

分 类 号：S513]