文献类型：期刊文章

作　　者：黄时海[1] 康超[1] 黄飞[2] 曹喜秀[1] 何鑫平[1] 汪晟[1] 吴孔阳[1] 曹普美[1] 梁智群[1] 李湘萍[3]

机构地区：[1]广西大学生命科学与技术学院,广西南宁530005 [2]南宁新技术创业者中心,广西南宁530007 [3]广西大学动物繁殖研究所,广西南宁530005

出　　处：《中国酿造》

基　　金：广西区教委人才项目(桂教人200962);国家大学生创新基金(091059318);广西大学实验教改项目(092301)

年　　份：2011

卷　　号：30

期　　号：2

起止页码：76-80

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、FSTA、IC、RCCSE、UPD、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：将康氏木霉(Trichoderma koningii)总RNA反转录成cDNA第一链,并以之为模板进行RT-PCR,合成约1.5kb的纤维二糖水解酶Ⅰ(cbh I)基因。cbhI基因经测序确认后克隆到表达载体pET-30a(+)上,PCR和双酶切鉴定筛选阳性重组子;将阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,并用0.4mmol/L的IPTG诱导表达重组蛋白。实验结果:cbh I基因在BL21(DE3)plysS中胞内融合表达,重组蛋白pNPC酶活为15.6U/L,最适反应温度为45℃,最适pH值为5.0,Mn2+对酶活力有明显的促进作用,SDS-PAGE表明重组蛋白分子量约为70kDa。

关 键 词：康氏木霉 纤维二糖水解酶I  cbhI基因  克隆表达

分 类 号：Q785]