文献类型：期刊文章

作　　者：郎景民[1,2] 布日额[1,3] 孙立杰[1] 刘娣[3] 吴金花[1] 锡林高娃[1] 刘燕[1] 史芬芳[4]

机构地区：[1]内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽028043 [2]内蒙古民族大学动物科技学院,内蒙古通辽028043 [3]黑龙江省农业科学院,黑龙江哈尔滨150086 [4]河北征宇制药有限公司,河北石家庄051431

出　　处：《中国预防兽医学报》

基　　金：内蒙古自治区高等学校科学技术研究项目(NJ09100);黑龙江省农业科学院博士后基金项目(LRB07-118);第45批中国博士后科学研究基金(20090451027);国家自然科学基金(31060352)

年　　份：2011

卷　　号：33

期　　号：1

起止页码：37-40

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：为测定牛源无乳链球菌表面免疫相关蛋白(sip)的抗原性,本实验通过建立间接ELISA方法,对该蛋白的抗原性进行分析及鉴定。根据无乳链球菌sip基因序列,设计一对引物,以临床分离菌株基因组DNA为模板,PCR扩增sip抗原表位优势区编码的基因序列,并将其与原核表达载体pET-30a(+)连接,构建重组质粒pET-sip,转化宿主菌BL21中,经IPTG诱导,获得重组蛋白,western blot分析表明,重组蛋白具有良好的抗原性。以纯化的表达产物作为包被抗原,建立检测无乳链球菌抗体的间接ELISA方法,确定抗原最佳包被浓度为3.125μg/mL,血清最佳稀释度为1∶160,酶标二抗最适稀释度为1∶4 000。应用该方法对无乳链球菌、化脓性链球菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌兔阳性血清进行检测,结果表明,该方法具有良好的特异性和灵敏度。

关 键 词：无乳链球菌 sip基因  原核表达 间接ELISA

分 类 号：S852.61]