文献类型：期刊文章

作　　者：王燕[1] 梁镇和[1] 张友尚[1] 崔大敷[2] 冯佑民[1]

机构地区：[1]中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室 [2]中国科学院上海生物化学研究所,上海200031

出　　处：《生物化学与生物物理学报》

基　　金：中国科学院基础性研究重大项目

年　　份：1999

卷　　号：31

期　　号：5

起止页码：587-589

语　　种：中文

收录情况：BIOSISPREVIEWS、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、EBSCO、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RSC、SCI-EXPANDED(收录号：WOS:000082673900021)、SCIE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：将猪胰岛素前体（ Ｐ Ｉ Ｐ） 基因和在其５′端引入９ 个氨基酸的间隔肽序列的 Ｐ Ｉ Ｐ 基因（ｓｐ Ｐ Ｉ Ｐ） 插入到 Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ 的分泌表达质粒ｐ Ｐ Ｉ Ｃ９ 中， 得到分泌表达质粒ｐ Ｐ Ｉ Ｃ９／ Ｐ Ｉ Ｐ 和ｐ Ｐ Ｉ Ｃ９／ｓｐ Ｐ Ｉ Ｐ 并用以转化 Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ Ｇ Ｓ１１５ 。用点杂交筛选， 获得高拷贝转化子 Ｐ３９（ｓｐ） 和 Ｓ５１（ ＋ ｓｐ） 。经１ Ｌ 摇瓶培养， Ｐ３９ 和 Ｓ５１ 在 Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ 中分泌表达 Ｐ Ｉ Ｐ 和ｓｐ Ｐ Ｉ Ｐ 的量分别为１０ ｍｇ／ Ｌ 和４０ ｍｇ／ Ｌ。ｓｐ Ｐ Ｉ Ｐ 在 Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ 中的表达水平高于其在本实验室报道的 Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ 和 Ｋ．ｌａｃｔｉｓ 中的表达， 表明间隔肽的引入有助于提高 Ｐ Ｉ Ｐ 的表达。用１０ Ｌ 罐发酵ｓｐ Ｐ Ｉ Ｐ 表达量达２５０ ｍｇ／ Ｌ。 Ｐ Ｉ Ｐ 和ｓｐ Ｐ Ｉ Ｐ 经转肽得到重组人胰岛素， 其受体结合能力与猪胰岛素相同， 体内生物活力２７ Ｉ Ｕ／ｍｇ 。

关 键 词：重组人胰岛素 分泌 甲醇酵母 表达体系  

分 类 号：Q782] Q578