文献类型：期刊文章

作　　者：刘燕[1] 彭聿平[2] 黄彦[2] 黄慧伟[2] 邱一华[2]

机构地区：[1]南通大学医学院诊断学教研室,南通226001 [2]南通大学医学院生理学教研室,南通226001

出　　处：《南通大学学报（医学版）》

基　　金：国家自然科学基金项目(30870929);南通市应用研究计划(K2008006;K2008019)

年　　份：2010

卷　　号：30

期　　号：6

起止页码：423-425

语　　种：中文

收录情况：JST、普通刊

摘　　要：目的:克隆microRNA-酪氨酸羟化酶(TH),构建慢病毒载体。方法:根据TH基因序列(NM_009377.1),设计并合成4对微小RNA(miRNA)的Oligo DNA,退火形成双链后与pcDNATM 6.2-GW/EmGFP-miRNA载体相连,用Gateway技术将构建好的pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-TH载体先后与中间载体pDONRTM221、慢病毒载体pLenti6/V5-DEST连接,构建慢病毒表达载体pLenti6/V5-DEST-TH,用脂质体2000(lipofectamine 2000)将慢病毒载体以及包装质粒(pLP1,pLP2和pLP/VSVG)共转染HEK-293FT细胞,收集上清,感染293T细胞株进行滴度鉴定。结果:测序结果表明,4对pcDNATM 6.2-GW/EmGFP-miR-TH表达载体序列与参考序列一致,构建出来的慢病毒载体在293FT细胞中包装成功,并通过293T细胞测得慢病毒滴度为5×106 TU/ml。结论:成功构建了TH的慢病毒干扰载体pLenti6/V5-DEST-TH,为利用RNA干扰技术进一步研究TH基因的功能和作用奠定了基础。

关 键 词：微小RNA 慢病毒载体 酪氨酸羟化酶

分 类 号：Q782]